人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响

摘要

目的:构建人反义 VEGF基因真核表达载体,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验.方法:RT-PCR法获得人VEGF基因,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定结果.用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO-8910,G418筛选获得阳性克隆,RNA斑点杂交鉴定HO-8910细胞中 VEGF表达.Western blot及间接免疫荧光法检测转染前后HO-8910细胞中VEGF蛋白表达.检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性.结果:RT-PCR法得到VEGF基因,并获得反向构建的VEGF真核表达载体.VEGF反义RNA部分阻断了HO-8910细胞中VEGF表达,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变.裸鼠体内致瘤性降低.结论:成功构建了反义VEGF基因真核表达载体,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的基因治疗提供了一定的实验依据.