针对Twist的短发夹RNA抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭

摘要

背景与目的:上皮-间充质转分化在胚胎发育和肿瘤转移过程中起重要作用.在发现人肺腺癌A549细胞高表达转录因子Twist的基础上,本实验研究了针对Twist的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞上皮-间充质转分化和体外侵袭能力的影响.方法:构建能表达针对Twist mRNA的shRNA的阳性RNA干扰(RNAi)质粒和表达不针对任何已知mRNA的shRNA的阴性RNAi质粒,分别转染至A549细胞,新霉素抗性筛选得到Twist表达受抑制的阳性RNAi细胞(Pi组)和Twist表达未受影响的阴性RNAi细胞(Ni组).针对正常(C组)、Pi、Ni三组A549细胞,分别采用RT-PCR和Western blot技术检测Twist、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘素表达,用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力.结果:C组:Twist和α-SMA表达强阳性,E-钙粘素表达弱阳性,Boyden小室穿膜细胞数为57.4±3.4;Pi组:和C组相比,Twist和α-SMA表达显著减弱(P＜0.01),E-钙粘素表达显著增强(P＜0.01),Boyden小室穿膜细胞数显著减少(P＜0.01);Ni组:Twist、α-SMA和E-钙粘素表达,及Boyden小室穿膜细胞数皆和C组无显著差异(P＞0.05).结论:针对Twist的shRNA能有效地抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭能力.