人Mad2基因正义真核表达质粒的构建及其对人卵巢癌细胞A2780紫杉醇敏感性的影响

摘要

背景与目的:紫杉醇是一种高效广谱的抗肿瘤药物,已常规应用于卵巢癌的化疗.但近年来随着耐药的发生,紫杉醇耐药已成为影响肿瘤化疗预后的主要难题,有研究显示紫杉醇药效的发挥与纺锤体检测点功能完整性相关.本研究通过构建人纺锤体检测点蛋白Mad2基因正义真核表达质粒,旨在探讨Mad2蛋白对人卵巢癌A2780细胞株紫杉醇敏感性的影响.方法:构建pEGFP-Mad2正义表达质粒,通过脂质体LipofectamineTM2000将其转入体外培养的人卵巢癌细胞株A2780中,应用RT-PCR、Western blot等方法分析相关基因和蛋白水平的变化情况;通过流式细胞术比较稳筛细胞对紫杉醇敏感性的改变情况.结果:成功构建了pEGFP-Mad2正义表达质粒;并筛选出稳定高表达Mad2的细胞株.RT-PCR、Western blot检测均显示稳定筛出的pEGFP-Mad2/A2780细胞株中Mad2呈高表达.流式细胞术检测结果显示,紫杉醇作用24或48 h后,对照组pEGFP-N1/A2780的细胞凋亡率分别为12.34%和58.76%,而pEGFP-Mad2/A2780组细胞凋亡率则分别为27.32%和87.53%,差异有统计学意义(P<0.05).结论:pEGFP-Mad2正义表达质粒能够有效上调A2780细胞中Mad2基因mRNA和蛋白的表达,并增加人卵巢癌细胞A2780对紫杉醇化疗的敏感性.