人甲基鸟嘌呤甲基转移酶基因真核表达质粒及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种含人甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)基因真核表达质粒的构建方法及其在耐药基因研究中的应用。具本包含了：利用RT－PCR从人肝脏组织中获得MGMT基因的cDNA，克隆入T载体。与含增强荧光蛋白的真核表达质粒酶切重组，构建含人MGMT基因的真核表达质粒。转染K562细胞加压筛选构建K562/MGMT稳定转染细胞系。本发明还包括了该质粒在改变肿瘤细胞和正常细胞耐药性方面的应用。本发明所提供的质粒构建方法基于常规的细胞与分子生物学实验条件，无需大型和复杂实验设施。操作简便，安全高效。所构建的质粒具有良好的理化稳定性，转染细胞后易于检测，高丰度表达。本发明为MGMT相关的耐药基因研究以及肿瘤的基因治疗研究提供了新的实验资源与手段，具有较好的推广与应用价值。