环孢霉素A对小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的影响及调控机制

摘要

目的 探讨环孢霉素A(CSA)对小鼠胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化的影响及调控机制.方法 应用分阶段胚胎干细胞向心肌细胞的分化系统,设ESCs自发组和CSA诱导组,用细胞免疫组织化学和流式细胞仪(FACS)评估心肌细胞分化率以及计数.细胞免疫化学检测CSA诱导出的心肌细胞标志物的表达.在ES细胞分化的不同阶段添加CSA,观察CSA是否特异地作用于某一特定的分化阶段.分别添加另外一种免疫抑制剂也是钙调磷酸酶抑制剂他克莫司(FK506)和T细胞核因子(NFAT)抑制剂11R-VIVIT,与添加CSA比较,比较各组的心肌细胞分化率.结果 ESCs自发组的心肌细胞分化率为(6.00±0.05)％,CSA诱导组为(60.00±0.08)％,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且诱导生成的心肌细胞具备心肌细胞特有的特征.CSA特异性地作用于中胚层干细胞,促进其分化成心肌于细胞;CSA强力促进中胚层干细胞分化成心肌细胞增多,相反分化成的上皮细胞减少;添加FK506和11R-VIVIT后没有出现类似CSA的促心肌分化作用.结论 CSA特异地作用于中胚层干细胞,通过非NFAT径路,能够强力诱导ESCs向心肌细胞分化.