阳离子脂质体-siRNA复合物对K562细胞凋亡诱导的作用机制

摘要

目的制备新型阳离子脂质体-siRNA复合物,并探讨其对K562细胞凋亡的诱导作用及作用机制。方法通过逆向蒸发技术制备阳离子脂质体复合物,以K562细胞为模型,使用不同浓度的脂质体-siRNA复合物转染K562细胞,MTT法测定脂质体-siRNA复合物对K562细胞生长的影响,流式细胞术检测脂质体-siRNA复合物对K562细胞周期的影响,反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测脂质体-siRNA复合物对K562细胞相关mRNA及蛋白表达的影响。结果与对照组相比,脂质体-siRNA复合物转染K562细胞增殖受到明显抑制,流式细胞术检测结果显示,阻滞于G_(1)期细胞明显增多(P<0.05),而S期和G_(2)/M期细胞显著减少(P<0.05),RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示,随着脂质体-siRNA复合物浓度的增加,K562细胞中bcl-2蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),bax、caspase-3蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)。结论新型脂质体-siRNA复合物转染率高,且沉默效果显著,可下调bcl-2基因,上调bax、caspase-3基因,进而促进K562细胞凋亡,有望成为慢性粒细胞白血病基因治疗的高效药物传递系统。