建立水合氯醛去除成骨细胞初级纤毛的细胞模型

摘要

目的:建立水合氯醛去除成骨细胞初级纤毛的细胞模型,并观察去除成骨细胞初级纤毛对电磁场提高成骨细胞ALP染色和钙化结节染色的影响.方法:贴壁法分离培养3只出生3d,体重6～9 g的雄性SD大鼠的乳鼠颅骨成骨细胞;待上述细胞生长至融合状态时传代培养并随机分成4组:不加水合氯醛组(对照组)、2 mM、4 mM和8 mM水合氯醛处理组;将上述4组细胞置于37℃、5％CO2的培养箱培养72 h,用激光共聚焦扫描显微镜观察初级纤毛形态,并用Image-Pro Plus 6.0软件分析成骨细胞初级纤毛发生率;筛选出能有效去除成骨细胞初级纤毛的水合氯醛浓度的细胞,并将其分为以下3组:正常对照组(control group,C),电磁场处理(electromagnetic fields,EMFs)组及电磁场处理+4 mM水合氯醛组.向上述3组细胞加入含10％FBS的DMEM培养液继续培养9d,碱性磷酸酶组织化学染色观察ALP的形成;培养12d,茜素红染色观察钙化结节的形成.结果:与对照组和2mM水合氯醛组相比,4mM水合氯醛能有效地去除成骨细胞初级纤毛的发生(P＜0.01);去除成骨细胞初级纤毛消弱了EMFs促进成骨细胞ALP和钙化结节的形成,具体表现在:与EMFs组相比,EMFs+水合氯醛组ALP和钙化结节的染色面积明显减少(P＜0.01).结论:4 mM水合氯醛能有效去除成骨细胞的初级纤毛;初级纤毛部分参与了电磁场促进成骨细胞ALP和钙化结节的形成,为探讨电磁场促进成骨细胞成熟矿化的机理提供新思路.