DNA-PKcs反义核酸增强HeLa细胞对辐射及化疗药物顺铂的敏感性

摘要

目的构建表达DNA-PKcs反义核酸的真核表达载体,建立DNA-PKcs表达被反义核酸抑制的细胞模型.方法采用RT-PCR扩增DNA-PKcs的cDNA片段,DNA重组技术构建四环素控制表达的真核表达载体;利用Lipofectamine介导基因转染,Western blot分析鉴定反义核酸抑制DNA-PKcs表达的细胞模型;细胞克隆形成法和细胞生长曲线分析细胞对UV和顺铂的敏感性.结果克隆了DNA-PKcs 5'端320 bpcDNA片段,重组于tet启动子控制表达质粒pCIneo-Tet-splice,转染Hela细胞,获得3个稳定转化克隆;Western blot结果表明细胞中DNA-PKcs表达受到反义核酸的抑制,并且细胞对紫外线辐射和顺铂敏感性增加.结论成功建立了DNA-PKcs表达受到反义核酸抑制的细胞模型,抑制DNA-PKcs表达提高了细胞的辐射和顺铂的敏感性.