铜绿假单胞菌外膜蛋白F原核载体构建、表达条件优化及免疫保护作用研究

摘要

目的 构建并鉴定铜绿假单胞菌(PA)外膜蛋白F(OprF)原核表达载体,分析OprF蛋白免疫保护作用,优化OprF蛋白诱导表达条件.方法 通过分子克隆获得OprF蛋白的表达菌株.利用切胶纯化获得OprF蛋白,免疫小鼠,通过PA攻毒实验分析OprF蛋白免疫保护作用.采用正交试验,获得OprF菌株的最佳表达条件与培养条件.结果 OprF重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果与预测一致.Western blot检测表明抗体能与OprF蛋白结合.OprF蛋白对小鼠保护率达64.29％.OprF菌株最佳诱导表达条件为:加IPTG终浓度0.1mmol/L,诱导时菌液OD600值1.0,温度32℃,诱导时间8h;最佳培养条件为:转速230 r/min,葡萄糖浓度为0％,装液量50 ml.结论 获得OprF表达菌株最佳的表达条件与培养条件;验证OprF蛋白对小鼠PA感染有免疫保护作用.