铜绿假单胞菌外膜蛋白Opr Ⅰ原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

摘要

目的:构建并鉴定铜绿假单胞菌(Pa)外膜蛋白Opr Ⅰ重组质粒pGEX-Opr Ⅰ,研究该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达.方法:PCR扩增OprⅠ抗原编码基因并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprⅠ;将pGEX-OprⅠ电穿孔转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹分析并鉴定表达产物.结果:扩增出194 bp的OprⅠ抗原编码基因;双酶切和PCR鉴定证实OprⅠ基因克隆入pGEX-1λT,并且pGEX-OprⅠ成功转入大肠杆菌BL21 (DE3);SDS-PAGE显示重组大肠杆菌BL21(pGEX-OprⅠ)的表达产物为相对分子质量约32 000的GST-Opr Ⅰ融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的20％;Western印迹证实该融合蛋白能被Pa感染的鼠血清特异性识别.结论:构建了重组质粒pGEX-OprⅠ,其在大肠杆菌BL21 (DE3)中表达具有抗原性的融合蛋白.