HSV-2潜伏相关转录体开发读码框2载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

摘要

目的:构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)的开放读码框2(ORF2)基因的真核表达载体pEGFP-ORF2,并检测其在SH-SY5Y细胞中的表达.方法:采用亚克隆技术构建HSV-2 LAT ORF2与EGFP基因融合的真核细胞表达载体pEGFP-ORF2,双酶切及测序鉴定;脂质体法转染试剂将重组载体转染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,G418筛选20天挑取表达pEGFP-ORF2的抗性克隆扩大培养,传代.荧光显微镜直接观察重组体在细胞中的表达.结果:重组质粒pEGFP-ORF2序列和方向正确;EGFP-ORF2融合基因在SH-SY5Y细胞中获得表达.结论:成功建立稳定表达pEGFP-ORF2的SH-SY5Y细胞株,为进一步研究HSV-2 LAT ORF2基因的功能奠定了实验基础.