补肾养血明目方基于线粒体途径对RPE细胞凋亡的保护作用研究

摘要

目的 探讨补肾养血明目方基于线粒体途径对RPE细胞凋亡的保护作用.方法 将ARPE-19细胞分为4组:正常组、模型组、空白肠吸收液组(对照组)、肠吸收液干预组(干预组).建立氢醌(HQ)诱导的ARPE-19细胞氧化损伤模型.正常组细胞,在常规培养液中培养;模型组细胞,90μM的HQ作用24 h;对照组细胞,空白肠吸收液干预24 h后,加入90μM的HQ作用24 h;干预组细胞,补肾养血明目方含药肠吸收液干预24 h后,加入90μM的HQ作用24 h.分别采用CCK-8法检测细胞活力,荧光分光光度法分析ARPE-19细胞线粒体膜通透转换孔(mPTP)的开放程度,ELISA技术测定细胞色素C(Cyt-c)含量的变化,TUNEL方法观察细胞凋亡情况.结果 (1)RPE细胞活力:与模型组比较,干预组(浓度分别为1％,2％,5％)RPE细胞活力提高(t 1％=-4.309,P=0.002;t 2％=-9.503,P=0.000;t 5％=-4.008,P=0.003),其中,浓度为2％的补肾养血明目方含药肠吸收液保护效果最好.(2)RPE细胞mPTP开放:与模型组比较,干预组Calcein平均荧光强度提高(t=-5.521,P=0.001),对照组无明显变化(P>0.05);与对照组比较,干预组Calcein平均荧光强度提高(t=-5.009,P=0.001).(3)RPE细胞胞浆Cyt-c含量:与模型组比较,干预组ARPE-19细胞胞浆Cyt-c含量降低(t=2.968,P=0.018),对照组无明显变化(P>0.05);与对照组比较,干预组Cyt-c含量降低(t=2.717,P=0.026).(4)RPE细胞凋亡:与模型组相比,干预组ARPE-19细胞凋亡率下降(t=2.360,P=0.029),对照组凋亡率无明显变化(P>0.05);与对照组相比,干预组细胞凋亡率下降(t=2.932,P=0.008).结论 补肾养血明目方含药肠吸收液可降低氧化损伤ARPE-19细胞mPTP的开放程度,抑制线粒体Cyt-c的释放,减少HQ诱导的ARPE-19细胞凋亡.线粒体保护是补肾养血明目方发挥抗HQ诱导的ARPE-19细胞氧化损伤的重要途径.