一株喜油嗜热芽孢杆菌G1201产高温蛋白酶的性质研究及异源表达初探

摘要

从高温环境中分离出产高温蛋白酶菌株,以脱脂奶粉为唯一碳氮源,通过形态学、生理生化特性和16S rRNA基因序列测定确定菌株种属;硫酸铵沉淀法获得高温蛋白酶的粗酶,并对其进行酶学性质分析;克隆编码高温蛋白酶的基因序列,构建表达载体在大肠杆菌中进行异源表达。结果表明:筛选到1株产高温蛋白酶的菌株G1201,经鉴定为喜油嗜热芽孢杆菌(Geobacillus thermoleovorans),所产高温蛋白酶大小52.5 kD,属丝氨酸蛋白酶家族,最适作用温度和pH分别为70℃和9.0,Ca^(2+)、Mg^(2+)、吐温20和TritonX-100对酶活有促进作用;异源表达结果显示产物以包涵体的形式存在,目的蛋白复性后含量为0.108 mg/mL。该菌株所产高温蛋白酶可耐受饲料、食品加工过程中的高温环境,具有良好的应用潜力。