奶山羊和荷斯坦奶牛乳腺组织mRNA差异显示体系建立

摘要

利用mRNA差异显示技术对关中奶山羊和荷斯坦奶牛泌乳末期乳腺组织进行差异表达基因分析,为进一步进行奶山羊泌乳分子生物学研究及筛选克隆差异表达基因、揭示膻味脂肪酸调控的分子机理奠定基础.研究通过对各影响因素进行单因素分析,建立了适合奶山羊和荷斯坦奶牛的乳腺差异显示分析体系,得到的最佳体系.在20 μL DDRT-PCRR反应总体系中各组分的添加量分别为:13.0 μL DEPC-H2O;1.0 μL 10×PCK Buffer(加Mg2+);1.5 μL dNTPs(各2.5 mmol/L);1.5 μL锚定引物H-T11M(20 μmol/L);1.5 μL随机引物(10 μmol/L);1.0 μL cDNA;0.5 μL Taq DNA Polymerase(2 U/μL).