干扰和过表达BAMBI基因对猪卵泡颗粒细胞表型和功能的影响

摘要

为研究转化生长因子-β(TGF-β)信号通路中的骨形态发生蛋白和激活素膜结合抑制剂(bone morphogenetic protein and activin membrane-bound inhibitor,BAMBI)基因对猪卵泡颗粒细胞的调控作用,本研究设计构建BAMBI干扰和过表达载体,并将构建好的干扰(pSIREN-BAMBI-sh1、pSIREN-BAMBI-sh2、pSIREN-BAMBI-sh3)和过表达(pcDNA3.1-BAMBI)重组质粒转染猪卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR技术进行有效片段的筛选,并对TGF-β信号通路下游基因(TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、SMAD1、SM AD2、SMAD3、SM AD4、SMAD5)和细胞凋亡基因(Bax、Bcl-2)mRNA的表达水平进行检测.最后,用MTT法和流式细胞术检测BAMBI干扰和过表达对卵泡颗粒细胞增殖及凋亡的影响.结果表明,BAMBI干扰和过表达载体成功构建,pSIREN-BAMBI-sh2抑制BAMBI表达的效果最好,干扰效率最高.干扰BAMBI时,TGF-βR Ⅱ表达量显著上升(P＜0.05),使得SMAD2、SMAD3的表达量显著上升(P＜0.05);过表达BAMBI时,TGF-βR Ⅱ表达显著下降(P＜0.05),使得SMAD2、SMAD3的表达量显著下降(P＜0.05);上调BAMBI可显著抑制猪卵泡颗粒细胞增殖,极显著促进猪卵泡颗粒细胞凋亡(P＜ 0.01).研究结果表明,BAMBI基因显著影响猪卵泡颗粒细胞的生长发育,可能通过调节TGF-β信号通路间接影响猪的繁殖性能.