绵羊生殖道抗菌肽cDNA克隆及真核表达载体构建

摘要

绵羊生殖道抗菌肽(ORTAP40)是从中国美利奴绵羊生殖道分离的一种新型的阳离子抗菌肽,在绵羊发育早期的防御中起到了主要的作用.在本研究中,根据ORTAP40端氨基酸序列设计引物,利用3'RACE技术克隆了绵羊生殖道抗菌肽3'末端全长cDNA序列,并被GrenBank收录,登录号为FJ514476,经过cDNA序列分析显示,ORTAP40是一个4.8 ku的小肽,与先期分离纯化的分子质量一致.作者随后参照巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性,设计并人工合成了ORTAP40成熟肽目的基因片段,所合成的ORTAP40基因全长120bp,通过基因重组的方法将目的基因克隆到pPIC3.5K和pPICZαA表达载体上,成功构建了重组酵母胞内表达载体pPIC3.5K-ORTAP40和外泌表达载体pPICZαA-ORTAP40为抗菌肽的开发和应用奠定了基础.