贝类单孢子虫半套式PCR检测方法的建立及初步应用

摘要

根据GenBank中单孢子虫的基因保守序列,设计了3条特异性引物,通过对半套式PCR扩增条件的优化,本研究建立了检测贝类单孢子虫的半套式PCR方法.该方法对单孢子虫模板进行扩增,得到与预期相符的333 bp特异性条带,而对折光马尔太虫、派琴虫、副溶血弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等病原体的扩增,结果均为阴性.敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到0.011 fg单孢子虫质粒DNA.用该半套式PCR对青岛沿海的贝类样品进行检测,结果从牡蛎和菲律宾蛤仔中分别检出单孢子虫6和8份,提示青岛沿海的养殖贝类中存在单孢子虫感染.结果表明,本研究建立的半套式PCR方法可用于贝类单孢子虫的临床快速检测.