H5亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR方法的建立与应用

摘要

H5亚型禽流感病毒HA序列差异越来越大.为更准确地检测H5亚型禽流感病毒,对GenBank中发表的H5亚型禽流感病毒HA序列以及本实验室保存病毒序列进行比对,同时设计1对引物和1条探针,建立了H5亚型禽流感病毒实时RT-PCR方法,并对该方法的反应体系和反应参数进行了优化.以本实验室分离测序确定的30份H5亚型禽流感病毒RNA为模板,将该方法与两种商品化H5亚型禽流感病毒检测试剂盒进行比对,发现该方法与两种商品化试剂盒的检出率分别为100％、98％、98％.敏感性试验显示,该方法可以检测出0.1 fg的RNA模板,灵敏度比两种商品化试剂盒均提高了10倍.结果 表明,该方法具有更高的特异性和敏感性,可用于H5亚型高致病性禽流感的早期诊断.