表达绿色荧光蛋白的鸭肠炎病毒gE基因转移载体构建

摘要

本实验利用PCR方法扩增DEV C-KCE株gE基因片段(包含gI基因及其侧翼序列),扩增产物克隆入pGEM-T载体测序后亚克隆至pUC19 EcoRⅠ、SalI位点间,获得pUC-gE.将增强型绿色荧光蛋白表达盒插入pUC-gEBamHI位点,构建转移载体pUC-gE-EGFP.该转移载体有7个单一酶切位点可供外源基因插入,上下游侧翼分别为1.57Kb和1Kb.将转移载体pUC-gE-EGFP转染鸭胚成纤维细胞(DEF),观察到绿色荧光,说明EGFP基因获得有效表达,为开发以鸭肠炎病毒为载体的多价、多联基因工程疫苗提供了物质基础.