抗KOD聚合酶单克隆抗体的制备

摘要

单克隆抗体具有高度的均一性和专一性.抗KOD聚合酶单克隆抗体,可以特异性结合于KOD聚合酶,抑制PCR反应前常温状态下的多聚酶活性,显著提高PCR反应的特异性.为了提高KOD聚合酶PCR反应的特异性,以KOD聚合酶为抗原,制备了两株抗KOD聚合酶的单克隆抗体.以大肠杆菌表达的重组蛋白KOD聚合酶为抗原免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过HAT选择培养、ELISA检测和有限稀释法克隆,建立了2株能稳定分泌抗KOD聚合酶单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1F5与3G6,对应的抗体亚型分别是IgG1和 IgG2a.染色体计数结果分别是85～90和83～86.1F5与3G6的细胞上清和腹水的ELISA效价分别为1∶28,1∶29和 1∶211,1∶211.间接免疫荧光证实制备的单克隆抗体的特异性良好.该结果为进一步建立高特异性的PCR方法奠定了良好的基础.