质谱法定量测定高密度脂蛋白结合蛋白的糖基化水平

摘要

采用质谱法对4种高密度脂蛋白(HDL)的结合蛋白重组人载脂蛋白血清淀粉样蛋白A(SAA)、α1-抗胰蛋白酶(A1AT)、α2-人体血清糖蛋白(A2HSG)和A载脂蛋白C3(Apo C3)从蛋白质含量(蛋白的绝对定量)、位点特异性糖基化(糖肽的相对定量)及聚糖位点占有率等方面进行了研究.利用四极杆-飞行时间质谱仪(Q-TOF)测量糖蛋白标样酶解产物的二级质谱碎片离子,用Byonic软件发现了新的糖基化位点信息,即增加了原位点处聚糖糖型的种类.对于A2HSG,新增了N-糖基化156位点上的4种糖型,N-糖基化176位点上的6种糖型,O-糖基化319位点的4种O-聚糖和O-糖基化346位点上的1种糖型.对于Apo C3,只有O-糖基化94一个位点,在此位点上新增了9种糖型.同时,调整了用于定量蛋白的多肽,使得定量更加准确.采用三重四极杆串级质谱仪(UPLC-ESI-QQQ)研究了4种结合蛋白中多肽和糖肽的多反应监测(MRM)行为,并重新计算了每种聚糖的位点占有率,优化了现有的定量方法.