ChBD和SUMO双功能融合肝素酶Ⅰ的设计与表达

摘要

利用ChBD和SUMO标签构建4种不同的融合蛋白体系,分别为ChBD-Hep I、ChBD-SUMO-Hep I、SUMO-ChBD-Hep I和ChBD-Hep I-SUMO。经过发酵工艺优化实验,确定该4种酶在最优条件下的摇瓶发酵酶活分别为2.44IU/mL、6.92IU/mL、6.01IU/mL和4.51IU/mL。同时,通过酶学性质研究,确定该4种重组酶的最适反应温度与pH分别为30℃和7.0,表明SUMO和ChBD标签不影响Hep I的催化反应。4种重组酶的热稳定性较天然Hep I明显提高,其中ChBD-SUMO-Hep I在30℃半衰期达50min,由此,确定其为最优菌株。将ChBD-SUMO-Hep I进行5L发酵罐扩大培养,酶活达到26IU/mL,是摇瓶培养的5倍,表明其具有工业化生产的潜质。