采用微团培养模型探讨染料木黄酮的发育毒性

摘要

目的:利用大鼠胚胎肢芽和中脑细胞微团培养模型研究染料木黄酮(genistein,GEN)的发育毒性,并探讨其发育毒性机制。方法:实验分为不同浓度的GEN(0、0.94、1.875、3.75、7.5、15.0μg/ml)染毒组,受试物分别作用于培养大鼠胚胎肢芽细胞和中脑细胞微团,采用中性红摄取法检测GEN对细胞增殖的影响,采用阿利新蓝染色方法检测GEN对肢芽细胞分化的影响,采用图像处理分析方法检测GEN对中脑细胞分化的影响。计算细胞50%增殖抑制浓度(IC50_P)和50%分化抑制浓度(IC50_D)。用不同浓度的雌激素受体拮抗剂ICI182780(0.1,0.5,1μmol/L)分别预处理细胞后再加入GEN(7.5μg/ml),观察雌激素受体途径在GEN诱导的发育毒性中的作用。结果:GEN对肢芽细胞的IC5_0P和IC5_0D分别为5.4μg/ml和4.9μg/ml,GEN对中脑细胞的IC5_0P为6.2μg/ml,IC5_0D分别为7.1μg/ml(集落分化个数)或5.3μg/ml(集落分化面积)。IC5_0P/IC50_D的比值均接近1。在GEN7.5μg/ml染毒组,用ICI182780预处理细胞,不能改变GEN诱导的发育毒性作用。结论:根据Flint's和欧洲替代方法验证中心ECVAM致畸物判别标准,并结合人体实际可能接触水平,认为GEN为强致畸物,并且对人类存在可能的风险。其致畸作用可能主要通过细胞毒性发挥作用,不依赖于雌激素受体途径。