南极假丝酵母脂肪酶B基因在大肠杆菌中的表达和发酵优化

摘要

旨在利用大肠杆菌实现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的高效可溶性表达,并降低生产成本.构建带有不同信号肽的CALB基因表达质粒,转化至不同大肠杆菌宿主中,在摇瓶中进行基础培养基、诱导条件、培养基组成成分和进程曲线的优化.结果显示,带有PelB信号肽的重组菌pET25b-CALB-1/Rosetta(DE3)在20°C下使用0.5％(W/V)乳糖在TY培养基中诱导表达效果最好,优化后的合成培养基成分为1.75％(W/V)山梨醇、2.25％(W/V)鱼蛋白胨、1％(W/V)安琪酵母提取物、0.75％(W/V)Na2HPO4.在摇瓶中诱导60 h后,CALB酶活力最高达到35.67 U/mL,相比于初始发酵酶活力提高了17.77倍,是目前大肠杆菌生产CALB的最高水平.成功地构建了大肠杆菌表达系统,经过系统优化后,CALB的高水平可溶性表达得以实现.