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数字PCR在转基因水稻拷贝数鉴定中的应用

         

摘要

The varied segments from field-growing 1-year old Pinus serotina spring stem and shoot tips from seed germination were used rnas explants.The explants were disinfected by 0.1% HgCl2, and those with favorable disinfection were used as sterile materials, and then the rncombination of medium type and the hormones for the axillary bud induction were optimized.The results showed that 10 min disinfection of rnmiddle parts of the spring stems by 0.1% HgCl2 was the optimal, the pollution rate was the lowest (0.8), and the best combination of medium rnand hormone levels to induce axillary buds was MS medium with 2.5 mg/L 6-BA and 0.2 mg/L NAA.And the optimal disinfected time of seed rnwas 4 min, the pollution rate was 2.4%, and the induction rate was the highest in the medium containing 0.7 mg/L NAA and 1.0 mg/L 6-BA.rnIn summary, an effective method to induce the axillary buds from the spring stem and seeds is established, which may provide theoretical rnevidences and technical support for the rapid and efficient breeding of Pinus serotina.%转基因作物中插入外源基因拷贝数等分子特征是转基因生物安全评价的重要内容,但是以往的拷贝数鉴定方法存在操作性差等不足,因此亟需操作简单且准确的鉴定方法.应用微流滴数字PCR方法鉴定转基因水稻中插入目的基因的拷贝数,测试方法的可行性.实验结果表明,4个重复样品的目的/内标准基因的比值分别为674/662、516/541、737/759、528/571,均值为0.97,因此验证的目的基因拷贝数为1,与Southern杂交结果一致.微流滴数字PCR作为插入外源基因拷贝数鉴定的新方法,具有操作简单、准确度高、设计灵活等优点.

著录项

  • 来源
    《生物技术通报》 |2018年第3期|53-58|共6页
  • 作者单位

    河北农业大学植物保护学院,河北保定071001;

    天津市农业质量标准与检测技术研究所,天津300381;

    天津市农业质量标准与检测技术研究所,天津300381;

    天津市农业质量标准与检测技术研究所,天津300381;

    天津市农业质量标准与检测技术研究所,天津300381;

    天津市农业质量标准与检测技术研究所,天津300381;

    天津农学院,天津300382;

    天津农学院,天津300382;

    中国农业科学院生物技术研究所,北京100081;

    河北农业大学植物保护学院,河北保定071001;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类
  • 关键词

    转基因水稻; 目的基因拷贝数; 微流滴数字PCR;

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