通过抑制PDHK3的表达降低乳酸水平增加CHO细胞抗体表达量

摘要

目的:通过抑制乳酸产生相关基因丙酮酸脱氢酶激酶3(PDHK3)的表达,降低CHO细胞系的乳酸表达,增加CHO细胞系蛋白表达量.方法:针对PDHK3序列设计特定的shRNA质粒,在CHO细胞系构建过程中将含有此shRNA的质粒与表达抗体蛋白的质粒一同转染至宿主细胞中,经过抗生素筛选后进行批次补料生产抗体蛋白.测定乳酸及蛋白产量,同时检测PDHK3基因的mRNA表达水平及shRNA质粒中的neomycin基因拷贝数.结果:利用此方法分别转染的不同抗体蛋白分子,PDHK3基因的mRNA水平降低了65.0％～76.0％,批次补料过程乳酸含量显著降低,同时相应的抗体蛋白表达量提升了18.6％～233.0％.结论:利用shRNA方法抑制乳酸相关的PDHK3基因的表达,可以有效降低乳酸表达,同时提高目的蛋白的表达.