人循环内皮细胞的分离和鉴定

摘要

目的建立从外周血中获取循环内皮细胞(CECs)的免疫磁珠分离技术.方法取1 mL全血按1:2稀释,加入20 μL抗CD146磁珠抗体,4℃孵育,再加入等体积缓冲液,置于磁架上,吸弃液体,用100 μL缓冲液重悬磁珠.用吖啶橙或Giemsa染色在荧光倒置相差显微镜下计数与磁珠结合的细胞,并用抗-vWF及CD31进行免疫细胞化学鉴定.结果经抗-vWF及CD31鉴定所分选的CECs是内皮细胞.正常健康体检者的CECs数量为10.5(6～16.5)个/mL.使用此法对正常人脐静脉内皮细胞(HUVECs)混合于正常人全血中的最高回收率为91%.结论用CD146免疫磁珠技术分离CECs,具有客观、准确、省时、特异性强及回收率高、取血量少和对内皮细胞损伤小的特点,本方法可用于不同疾病患者血液中CECs的定量检测及其功能状态分析.