RNAi靶向沉默FLIP基因促进TRAIL诱导卵巢癌A2780细胞凋亡

摘要

目的 探讨RNAi靶向沉默FLIP基因对TRAIL诱导卵巢癌细胞凋亡的影响.方法 设计并体外化学合成FLIP序列特异性双链RNA,在脂质体(LipofectamineTM2000)介导下转染人卵巢癌细胞株A2780.采用半定量RT-PCR和Western blot法检测FLIP-siRNAs转染前后A2780细胞FLIP mRNA和蛋白表达的变化,并筛选出抑制作用最强的FLIP-siRNA.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测FLIP-siRNA转染前后TRAIL对A2780细胞生长抑制作用的变化.以Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)比较FLIP-siRNA转染前后TRAIL诱导的细胞凋亡的情况.结果 特异性FLIP-siRNA片段能有效降低A2780细胞中FLIP mRNA和蛋白水平(P<0.01),并具有时间依赖性;转染FLIP-siRNA后,TRAIL对A2780细胞的生长抑制作用明显增强(P<0.05),TRAIL诱导的细胞凋亡也显著增加(P<0.05).结论 靶向FLIP基因的siRNAs可在转录和翻译水平抑制FLIP表达,并可增加细胞对TRAIL的敏感性.