利用原代培养神经元研究netrin-4的受体定位

摘要

目的 利用体外原代培养神经元,研究神经突起诱向因子netrin-4的受体,分析netrin-1已知受体DCC和UNC5H1作为netrin-4受体的可能性. 方法 改良Koh法培养出生12 h内Wistar乳鼠神经元,免疫细胞化学鉴定纯度;以碱性磷酸酶(AP)标记的netrin-4为配体,以神经元及转染DCC和UNC5H1的CO57细胞为对象,亲和细胞化学法检测netrin-4的受体;RT-PCR法分析神经元中netrin-4、DCC和UNC5H1的表达. 结果 成熟神经元胞核大,突起长,交织成网;以抗神经丝蛋白(NF)抗体行免疫细胞化学鉴定,纯度较高;转染DCC和UNC5H1的COS7能与AP4-netrin-4结合,定位在细胞膜上. 结论 建立起稳定的原代神经元培养法,并研究神经突起诱向因子受体的定位.DCC和UNC5H1可能是netrin-1与netrin-4的共受体.