稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系的建立与鉴定

摘要

目的 建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系并研究CKS2敲除对卵巢癌OVCAR3细胞增殖的影响.方法 根据siRNA的原理设计2对靶向CKS2的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(pLVTHM/CKS2 shRNA重组质粒);先用pLV-tTR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染OVCAR3细胞;在此基础上再用pLVTHM/CKS2 shRNA重组质粒制备慢病毒并感染上述OVCAR3细胞;对上述两次慢病毒感染的OVCAR3细胞,用强力霉素(DOX)处理72 h后,用real time PCR及Western blot检测CKS2 mRNA及蛋白的表达;用MTT法检测细胞增殖.结果 构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染OVCAR3细胞;建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的OVCAR3细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中CKS2在mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.05,P＜0.01);CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞的增殖.结论 建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的OVCAR3细胞系,DOX诱导的CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞增殖.