重组慢病毒表达PML核定位信号缺失体抑制急性早幼粒白血病细胞系c-Myc蛋白表达

摘要

目的 构建携带PML(△NLS)基因的重组慢病毒,研究其对NB4细胞中c-Myc蛋白表达的影响.方法 以质粒pCMV-HA-PML(△NLS)为模板,PCR扩增PML(△NLS)基因,克隆入慢病毒载体LV5-EF1a-GFP/puro,与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,包装病毒.收取病毒上清液,纯化后感染NB4细胞,荧光倒置显微镜观察感染效率,RT-PCR法检测PML(△NLS) mRNA的转录水平,Western blot检测PML(△NLS)、β-catenin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达的变化.CCK-8实验观察细胞增殖.结果 成功构建PML(△NLS)过表达慢病毒,病毒感染NB4细胞,感染效率达82.74％,LV5-PML(△NLS)携带的PML(△NLS)能够在NB4细胞中稳定表达;感染LV5-PML(△NLS)的NB4细胞中β-catnin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达下降(P＜0.05);NB4细胞增殖活力明显高于未感染组和空病毒载体组(P＜0.05).结论 成功构建了重组慢病毒PML(△NLS),PML(△NLS)过表达可促进NB4细胞体外增殖,并抑制c-Myc蛋白表达.