SYBR Green荧光定量PCR检测293A细胞UCP2基因表达方法的建立

摘要

目的:建立验证293A细胞UCP2基因表达情况的SYBR Green荧光定量PCR方法.方法:2μg 293A细胞总RNA用于逆转录,所需的反应体系为20L,其中包含2μg RNA,1mM dNTP,1U/L RNA酶抑制剂,2.5pmol/L Olig(dT)18引物,0.5U/L AMV逆转录酶.PCR最佳反应条件为:95℃ 5min,95℃ 30s,60℃ 60s(40个循环),72℃延伸3min.结果与结论:根据溶解曲线分析,扩增产物中无引物二聚体的影响,说明所设计引物特异,退火温度合适.这表明本研究建立的SYBR Green荧光定量检测方法灵敏度高、定量范围广.