lncRNA ANRIL调控ATM-E2F1信号通路在胆囊癌上皮间质转化中的作用

摘要

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)ANRIL负反馈调控ATM-E2F1信号通路在胆囊癌上皮间质转化(EMT)中的作用及机制.方法 选择人正常胆囊上皮细胞和胆囊癌GBC-SD、NOZ细胞,构建过表达ANRIL质粒、过表达ATM载体及oe-ATM+oe-ANRIL共转染GBC-SD细胞;RT-qPCR检测ANRIL及各组ATM-E2F1信号通路中ATM、E2F1、INK4A、INK4B和ARF的mRNA表达;Western blotting检测各组EMT标志物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)及ATM-E2F1信号通路蛋白(ATM、E2F1、INK4A、INK4B、ARF)的表达;采用小分子药物抑制ATM-E2F1信号通路调控的胆囊癌细胞EMT过程;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;MTT检测细胞增殖活力.结果 胆囊癌细胞中ANRIL的表达水平显著高于正常胆囊上皮细胞(P<0.05).过表达ANRIL可抑制胆囊癌细胞中INK4B、INK4A、ARF的表达,导致上皮性标志物E-cadherin表达下调,而间质性标志物N-cadherin、Vimentin表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05).过表达ATM可促进抑癌基因INK4B、INK4A、ARF的表达,导致E-cadherin表达上调,N-cadherin、Vimentin表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05).使用ATM激酶抑制剂CGK733处理ATM过表达的胆囊癌细胞后,E-cadherin表达下调,N-cadherin、Vimentin表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05).过表达ANRIL或抑制ATM-E2F1信号通路能够促进胆囊癌细胞的增殖、迁移和侵袭.结论 lncRNA ARNIL在胆囊癌中呈高表达,并依赖于ATM-E2F1信号通路促进胆囊癌细胞发生EMT,提示在治疗胆囊癌时可通过靶向沉默ANRIL或激活ATM-E2F1信号通路来抑制胆囊癌细胞发生EMT,从而提高其临床疗效.