豫南黑猪心脏cDNA文库的构建与鉴定

摘要

以豫南黑猪心脏为供试材料,采用改进的异硫氰酸胍法提取心脏总RNA.通过SMART技术反转录合成全长cDNA,经LD-PCR扩增后与pMD18-T载体连接并转化细菌DH5?琢,测定滴度和重组率,构建成豫南黑猪心脏全长cDNA文库.经初步检测,原始文库的滴度为1.8×105 cfu/mL,重组率约为94.4%.从原始文库随机挑取13个单菌落过夜培养,提取质粒,经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切,凝胶电泳显示插入片段大小在0.3～2.0 kb之间.