miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的 研究miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100和不同乳腺癌细胞中miR-187的表达水平.在MDA-MB-231细胞中分别转染miR-187 mimics(miR-187组)或阴性对照mimics-NC(miR-NC组),以未转染的MDA-MB-231细胞为空白对照(空白对照组).采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测转染后细胞中miR-187和IGF-1R蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况.Western blot检测与增殖和凋亡相关蛋白表达水平.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-187与IGF-1R靶向调控关系.结果 与人正常乳腺上皮细胞HBL-100(1.00±0.10)相比,乳腺癌细胞中miR-187表达水平明显降低(P<0.05),在MDA-MB-231细胞中表达水平最低(0.11±0.01).与miR-NC组和空白对照组相比,miR-187组的miR-187表达水平明显上调[(0.98±0.09)、(1.00±0.11)比(3.18±0.33),P<0.05],IGF-1R蛋白表达水平明显下调[(0.28±0.03)、(0.27±0.03)比(0.09±0.01),P<0.05],细胞增殖活力OD值[(0.79±0.08)、(0.82±0.08)比(0.43±0.04)]和PCNA表达水平[(0.39±0.04)、(0.40±0.04)比(0.20±0.02)]均显著降低(P<0.05),凋亡率[(5.02±1.13)％、(4.61±1.01)％比(20.38±3.44)％]和Cleaved Caspase-3表达水平[(0.09±0.02)、(0.08±0.02)比(0.58±0.07)]显著升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验显示miR-187与IGF-1R基因3'非编码区(UTR)存在靶向关系.结论 miR-187对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制与靶向抑制IGF-1R基因表达有关.