哺乳动物细胞中EB病毒诱导基因3的定位及表达

摘要

目的 构建带有FLAG-tag的人野生型EB病毒诱导基因3(EBI3)真核表达载体,用其转染COST和HEK 293T细胞,观察EBI3在哺乳动物细胞中的定位和表达情况.方法 设计带有FLAG-tag的引物,以含人EBI3全长cDNA序列的质粒为模板,以PCR方法扩增出EBI3全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中,构建pCDNA3.1-EBI3-FLAG质粒.将重组质粒转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察其在胞内的定位情况；转染至HEK 293T细胞,提取细胞总蛋白进行Western blot.结果 正确构建pCDNA3.1-EBI3-FLAG质粒；荧光定位实验表明在COS-7细胞中,EBI3蛋白主要分布在细胞质中,且较集中分布于靠近核膜的位置.Western blot结果表明该质粒能在细胞中有效表达.结论EBI3在COS-7细胞中有表达,且主要分布在胞质内,该研究结果为了解EBI3在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能奠定了一定基础.