神经生长因子基因的克隆及在昆虫细胞中的表达

摘要

以人胎盘组织DNA为模板,经PCR扩增出包含信号肽,前肽和成熟肽部分的prepro-NGF序列,经序列分析后克隆至转移载体pFastBac1中得到pFastBac-NGF,再将其转化含穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac,发生转座作用后,得到含NGF基因的重组穿梭载体rBacmid-NGF,用纯化的rBacmid-NGFDNA直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV-Bac-hGH,经PCR和酶切鉴定,NGF基因正确地插入在病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测在34 kD左右有一表达带并具有神经生长因子的免疫学活性.