IL-6/JAK/STAT3信号通路抑制剂细胞筛选模型的验证和应用

摘要

IL-6/JAK/STAT3是细胞内调节细胞生长、存活和分化的重要信号通路,这条信号通路也控制着T淋巴细胞的分化和激活。IL-6/JAK/STAT3信号通路的异常与自身免疫性疾病和肿瘤密切相关,已经成为药物研发的热门靶点。本研究利用Invivogen公司稳定表达IL-6受体且可与STAT3结合的分泌胚胎碱性磷酸酶（secreted embryonic alkaline phosphatase,SEAP）报告基因的HEK-Blue IL-6细胞,给予IL-6刺激下分泌SEAP,通过与QUANTI-Blue反应,在655 nm检测SEAP的生成量,评价化合物对IL-6刺激的STAT3信号通路的抑制作用。结果表明,IL-6可特异性地激活HEK-Blue IL-6细胞。在细胞数为5×10~4个/孔、1 ng·mL-1浓度IL-6刺激20 h,并于QUANTI-Blue反应1 h时检测OD655吸光度值为最佳反应条件。在筛选的14个天然产物中,牛蒡子苷元、隐丹参酮和姜黄素具有很强的抑制STAT3信号通路的活性,IC50值分别为1.28、2.96和6.61μmol·L-1。该HEK-Blue IL-6细胞模型适用于IL-6/JAK/STAT3信号通路抑制剂的筛选。