大鼠海马神经元及星形胶质细胞的体外培养

摘要

目的:改进大鼠海马神经元、星形胶质细胞及两者混合状态的体外培养方法,获得高纯度的海马神经细胞。方法:选取孕期18~20d的SD大鼠胎鼠作为原代海马细胞培养的材料来源。断头后于冰板上剥离双侧海马,去除表面血管及薄膜,利用眼科剪分离为小块。随后使用冷平衡盐溶液洗涤3次,将海马组织碎块移入酶消化液中。本方法选择Accutase和0.1%DNase作为酶消化液,37℃消化15min,期间轻柔振动。使用冷平衡盐溶液洗涤3次,终止消化。0.1%DNase加入Neurobasal和B-27的混合液对消化后的海马组织碎块进行轻柔吹打,获得单细胞悬液。将悬液过200目筛,进行细胞计数。将过筛的单细胞悬液移入DMEM培养基(DMEM+10%胎牛血清)中,按照每平方厘米2.5×104的细胞密度进行接种。经PDL孵育的塑料片置于培养基底部。细胞于37℃、5%CO2培养箱内培养。4h后,依据所需细胞种类的不同,更换相应培养基。海马神经细胞于培养后7~10d可用于实验。结果:通过本方法可得到高纯度的大鼠海马神经细胞,且根据实验需求,通过更换培养基,可得到纯神经元、纯胶质细胞及两者混合的三种培养状态。培养的神经元及星形胶质细胞纯度均>98%。结论:该文在传统海马神经细胞体外培养方法基础上,进一步降低了实验操作难度,方法稳定有效。