苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的克隆

摘要

以耐盐的苜蓿中华根瘤菌０４２Ｂ为材料，制备其总ＤＮＡ，经过限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ的部分酶解，利用电洗脱方法回收１５￣２５ｋｂ大小的ＤＮＡ片段。以碱法制备载体质粒ｐＬＡＦＲⅠ，用ＥｃｏＲⅠ将其切成线状，然后用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将回收片段与线状载体连接，利用包装蛋白进行包装后，感染大肠杆菌Ｓ１７－１，构建了０４２Ｂ的基因文库。以固体亚硝基胍作为诱变剂处理出发菌株，在０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的条件下，从２