苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关基因rstA在大肠杆菌中的高效表达及其产物的纯化

摘要

苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM与耐盐有关的1.9kb DNA片段含有两个开放阅读框,采用PCR方法分别将它们扩增,连接到穿梭质粒上,并进行了耐盐功能检测,证明其中的ORF2具有耐盐性,定名为rstA基因.将它分别克隆到表达载体pThio-HisA、B和C上,构建成重组质粒pGSA、pGSB和pGSC,转化大肠杆菌(Escherichia coli)Top10后,经IPTG诱导,pGSA获得高效表达.表达蛋白占菌体总蛋白的36%,但大多数以包涵体形式存在.对表达产物依次进行ProBondTM树脂亲和纯化、饱和硫酸铵盐析,最后得到纯度为95%的融合蛋白.SDS-PAGE显示纯化的蛋白质为分子量43kD的单一蛋白带,经Western blot检测证实了表达结果.