费氏中华根瘤菌与耐盐有关基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

费氏中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ）ＲＴ１９与耐盐有关的４．４ｋｂ ＤＮＡ片段含有３个相间的开放阅读框，经亚克隆及功能检测，证实其中的ＯＲＦ２与耐盐有关。将ＯＲＦ２分别克隆到表达载体以ｐＴＨｉｏＨｉｓＡ、Ｂ和Ｃ上，得到３个重组质粒ｐＧＡ、ｐＧＢ和ｐＧＣ，转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＤＨ５α。经ＩＰＴＧ诱导后和作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，发现只有ｐＧＣ编码的融合蛋白获得了表达。其分子量为５３ｋＤａ，恰好是ｔｒｘＡ基因编码的硫氧还蛋白与推测的蛋白质分子量之和。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实，表达的蛋白质是ｔｒｘＡ基因和目的基因编码的。