泡盛曲霉抗FOA突变株的筛选与转化

摘要

根据泡盛曲霉SG1菌株分生孢子的紫外线致死曲线,选择死亡率为85%～90%的诱变时间诱变分生孢子,然后将其涂布于含FOA(5-flourooroticacid)和尿嘧啶核苷的基本培养基上,选择抗FOA的突变株.经过纯化和回复突变检测后,获得了5株需要尿嘧啶或尿嘧啶核苷才能在基本培养基上生长的稳定突变株.进一步分析鉴定结果表明,这些突变株的URA3基因发生了突变.Northern杂交及RT-PCR方法证明这些突变株中URA3基因突变均发生在转录水平上.选择突变株SA5作为受体菌,用含来自黑曲霉的野生型URA3基因的质粒转化该受体菌,结果获得了稳定的转化子.Sourhern杂交证明野生型URA3基因取代了突变株的ura3基因.