根癌农杆菌介导黑曲霉转化效率的优化及突变株的筛选

摘要

为了提高根癌农杆菌介导黑曲霉转化效率.本文对影响转化效率的分生孢子与农杆菌的比例、转化媒介、诱导溶氧、诱导时间、诱导时乙酰丁香酮浓度这五个因素进行根癌农杆菌介导黑曲霉的单因素转化试验,观察上述条件下的根癌农杆菌介导黑曲霉的转化效率,并确定提高其转化效率的最优条件.结果表明，转化效率的最优条件为:根癌农杆菌诱导过程在400μmol/L乙酰丁香酮终浓度条件下,100mL三角瓶中,28℃、100r/min振荡培养5h,分生孢子与农杆菌的比例为1∶100,在硝酸纤维膜媒介上24℃共培养48h.黑曲霉的转化效率能达到35个/107分生孢子.相比于优化前,转化效率提升了78％,并且整合至黑曲霉基因组的外源潮霉素抗性基因在转接15代以后仍能稳定遗传,并在众多转化子中筛选得到不产孢突变株.