白念珠菌H310D突变型14α-去甲基化酶的克隆、表达及活性的初步研究

摘要

利用错配内部引物,采用重组PCR方法获得H310D突变型白念珠菌14α-去甲基化酶(CYP51),构建H310D突变型CYP51蛋白的表达载体pYCYP51M,转化进入酵母菌INVSC-1中,半乳糖诱导蛋白的表达,微量液基稀释法测定表达野生型及突变型CYP51蛋白的宿主酵母菌对氟康唑的MIC.表达的CYP51蛋白占微粒体蛋白酶系的15%;表达突变蛋白的酵母菌MIC值是表达野生蛋白的酵母菌MIC值的2倍.CYP51蛋白H310D的突变导致表达突变蛋白的酵母菌对氟康唑MIC的升高,证明H310残基对CYP51蛋白与氟康唑的结合有一定作用,为研究新型抗真菌前导化合物寻找新的靶点.