一种从感染的培养细胞中分离细菌RNA的方法

摘要

病原菌全基因组表达谱研究是阐明其致病机理的必要的基础,已经成为当前生命科学领域的热点和重点;然而由于难于从感染的组织中快速固定并分离细菌RNA,从而极大的制约了该研究的进展.介绍一种从感染的细胞中分离细菌RNA的方法--冷酸酚法,其主要特点是:(1)使用可以破碎真核细胞但不影响细菌细胞完整性的SDS浓度,实现了从感染的细胞中快速分离完整的细菌,减少了宿主细胞RNA的污染;(2)在将细菌从细胞中分离的同时即利用苯酚-乙醇混合液将其总RNA快速固定,既减少了RNA的降解,又最大限度地保持了细菌在哺乳细胞内原有的表达模式;(3)可以从108个菌体中提取到至少30μg的总RNA,足够用于反转录等其他研究.该方法将为利用DNA Microarray技术进行的病原菌表达谱研究提供有益的借鉴.