猪Ⅱ型圆环病毒全基因组的克隆及感染性鉴定

摘要

设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)全基因组的特异性引物,从3份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中,PCR扩增和克隆了3株PCV-2全基因组序列.将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较,并绘制系统发育进化树.结果显示,所测毒株间的核苷酸同源性为95.7%～99.4%,与其它毒株的同源性较高,达95.1%以上;ORF1的核苷酸同源性高达97.8%以上,氨基酸同源性大于98%;ORF2的核苷酸同源性较低,为90%～98%不等,推导的氨基酸序列同源性介于87%～99.1%.进化树分析表明各分离毒株在进化上存在地域上的相关性.将克隆到的PCV-2基因组环化后,脂质体介导转染PK-15细胞,盲传3代.间接免疫荧光检测表明,克隆到的基因组具有感染性.