硫酸软骨素酶产生菌的筛选及酶的分离纯化

摘要

利用平板快速筛选法,从鱼腹中筛选到一株产生硫酸软骨素酶的细菌YH311,通过生物特性和生化反应试验考察,初步鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria).培养至36h时,该菌株产酶达到高峰期,培养液的酶活力达0.9U/mL.利用超声波破碎菌体细胞,分别测定培养液和菌体细胞的酶活力,发现培养液的酶活力要远远大于菌体细胞的酶活力,显示该酶为分泌型表达,属于胞外酶.发酵液经离心后,上清液用硫酸铵分级沉淀,再分别经过CM-Cellulose、QAE-sephadex A50和Sephadex G-150层析柱进行逐级分纯,并跟踪酶活,最后获得硫酸软骨素酶.SDS-PAGE检测为单一条带,其分子量约为80kD.