猪源马链球菌兽疫亚种表达的类M蛋白黏附抑制性单抗的获得

摘要

根据马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)猪源株ATCC35246株的类M蛋白基因序列,通过PCR技术,扩增出无信号肽的类M蛋白基因并定向克隆至表达载体pET-32a(+)中.重组质粒经酶切鉴定和测序后,在大肠杆菌BL21中表达,获得60kDa产物,Western blot显示,其与ATCC35246株多克隆抗血清反应,抗原性良好.以His亲和层析柱纯化重组类M蛋白作为抗原免疫8周龄的BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备了12株稳定分泌抗类M蛋白单抗的细胞株,特异性检测显示其与A群链球菌、猪链球菌2型以及马链球菌马亚种等没有交叉反应.单抗亚类鉴定显示,其中6株为IgG1,3株为IgG2,另外3株为IgM.从腹水中纯化的单抗效价为2.56×104～1.01×105.黏附抑制实验显示,其中一株单抗能阻断类M蛋白黏附HEp-2细胞.