马链球菌兽疫亚种类M蛋白的基因克隆、序列分析及其在猪源链球菌的检测

摘要

根据已发表的马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)马源株的类M蛋白基因序列,设计和合成一对引物,以兽疫亚种猪源ATCC35246株的基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增出类M蛋白基因并定向克隆至表达载体pET-32a(+)中,测定其序列,GenBank接收号为AY263781.类M蛋白基因含一个完整的开放阅读框,全长为1137bp,编码379个氨基酸残基.经DNA Star软件分析,ATCC35246株类M蛋白基因与兽疫亚种马源W60株、马亚种的类M蛋白基因及A群化脓链球菌的M蛋白基因的同源性分别为86.9%、30.8%、29.4%;推导的氨基酸序列的同源性分别为84.3%、21.9%、23.4%.但ATCC35246株类M蛋白的C末端细胞膜锚定区与M蛋白、马亚种类M蛋白高度同源.用上述设计的引物进行PCR试验,检测34株猪源链球菌类M蛋白基因,发现所有16株C群猪源链球菌均能检测出类M蛋白基因,而所有猪链球菌(Streptococcus suis)1型和2型菌株及S群、B群、D群链球菌共13株均不能检出类M蛋白基因,而5株未鉴定的猪源链球菌中3株能检测出类M基因.